Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) рака молочной железы: что показывает, расшифровка результатов. Как проводится игх анализ

Сущность исследования

Под данным исследованием подразумевается изучение образца тканей под микроскопом. Их получают при помощи биопсии и предварительно обрабатывают специфическими антителами.

Онкологические заболевания давно находятся в поле зрения врачей и ученых. В ходе многочисленных исследований было установлено, что злокачественные клетки в процессе жизнедеятельности продуцируют специфические белки, которые называют антигенами. Они связываются с антителами, именно на этом основано иммуногистохимическое исследование, когда ткань пациента, взятая для изучения, после обработки тщательно изучается при помощи микроскопии.

Когда антитела взаимодействуют с раковыми клетками, то можно наблюдать явление флуоресценции. Это дает основания практически на 100 % быть уверенным, что имеет место онкология.

Сейчас уже разработаны и активно внедрены в медицинскую практику антитела практически ко всем новообразованиям.

Суть исследования

Иммуногистохимическое исследование также называют ИГХ. Метод основан на взаимодействии определенных антител с белковыми структурами и рецепторами раковых клеток. Если в молочной железе появилась опухоль, введенные в ткань антитела присоединяются к раковым клеткам и дают свечение определенной длины волны. Метод позволяет выявить точное расположение основной опухоли (очага) и метастазов (если таковые имеются).

Наличие или отсутствие карциномы молочной железы определяется по рецепторам двух гормонов: эстрогена и прогестерона. Также исследование определяет уровень рецепторов HER2.

HER2 – вещество, которое активирует рост белков на внешней мембране клеток эпидермиса. Если рецепторов HER2 в образце ткани больше нормы, это говорит о развитии карциномы. Суть метода сводится к тому, чтобы определить с помощью антител концентрацию рецепторов HER2, прогестерона, эстрогена и онкобелка Ki-67.

Иммуногистохимия рака молочной железы также проводится непрямым методом с помощью биотин-авидинового комплекса. Непрямой метод состоит из трех этапов:

  • В образец ткани, взятый при биопсии, вводятся первичные антитела. Если в ткани есть опухоль, эти антитела контактируют с антигенами раковых клеток.
  • Затем вводятся вторичные антитела, для которых антигенами являются первичные антитела. В итоге вторичные антитела соединяются с первичными.
  • Вводится комплекс, который состоит из трех субстанций: биотин, авидин и специальный фермент. Он находит вторичные антитела и соединяется с их биотином.

У непрямого метода ИГХ есть 3 преимущества:

  • Реакция происходит в течение всего трех часов.
  • Он увеличивает чувствительность определения антигенов.
  • На анализ нужно меньше антител.

Вне зависимости от методики исследование позволяет:

  • Определить тип новообразования.
  • Заметить злокачественную трансформацию раковых клеток.
  • Выявить очаг и метастазы.
  • Прогнозировать дальнейшее развитие опухоли.
  • Вовремя назначить лечение и спасти пациента.

Возможности исследования

Иммуногистохимическое исследование при раке позволяет:

  • Распознать новообразование и определить его разновидность.
  • Выяснить распространенность первичного очага по организму.
  • При взятии биологического материала из вторичных очагов можно определить источник распространения метастазов.
  • Исследование позволяет оценить эффективность терапии.
  • При помощи анализа можно выяснить, на какой стадии развития находится раковая опухоль.
  • Иммуногистохимическое исследование позволяет также выяснить скорость роста новообразований.

Данный метод исследования считается более информативным по сравнению с обычным гистологическим. Если использовать оба метода исследования, то можно получить полнейшую картину, поэтому на практике чаще всего врачи так и поступают.

Методика проведения анализа

Реакцию можно получить несколькими способами. Часто применяется прямой, при котором используется один вид маркированных антител. Последние должны связаться с выявляемым веществом или молекулой-мишенью. Если последняя присутствует в биоптате, то исследуемая ткань окрашивается.

Непрямой метод считается более информативным и чувствительным. Его суть заключается в поэтапном введении 2 разных антител. Немаркированные первичные антитела вступают в реакцию с опухолевым антигеном в биоптате, образуют комплекс антитело-антиген. Затем вводят вторичные уже маркированные антитела (реагент), которые связываются с определенной частью молекулы первичного антитела. Т. е. первичные антитела являются антигенами для вторичных.

Этот анализ показан пациентам с подозрением на рак молочной железы или людям, которые испытывают неприятные ощущения или боль при прощупывании сосков. Иммуногистохимическое исследование помогает врачам выявить расположение опухоли. Однако если в организме появились метастазы, иммуногистохимия выявит и их.

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) рака молочной железы: что показывает, расшифровка результатов. Как проводится игх анализ

Большое преимущество метода – отсутствие противопоказаний. Любой мужчина или женщина может сдать анализ, если переживает из-за неприятных ощущений или болей в груди. Если опухоль выявлена на раннем этапе (когда она состоит из доброкачественных клеток), пациенту не потребуется операция или вредная для иммунитета химиотерапия. В этом случае достаточно провести курс гормональной терапии. Положительный исход наступает в 75–80 % случаев.

Исследовать при помощи этого метода можно практически все ткани человеческого организма, но чаще всего такой анализ назначают при подозрении на онкологию.

Исследование применяют:

  1. Для определения первичных новообразований.
  2. Для выявления метастазов.
  3. Данный анализ помогает определить прогноз развития и протекания патологии.
  4. Анализ служит одним из методов исследования рецепторов к ряду гормонов.
  5. ИГХ-исследование позволяет обнаружить микроорганизмы.
  6. Метод исследования применяют для выяснения чувствительности раковых клеток к химиотерапии и радиотерапии.

Преимуществом такого метода исследования является также отсутствие противопоказаний. Сложность может возникнуть только в том случае, если раковое образование расположено в труднодоступном месте.

Иммуногистохимическое исследование проводится в несколько этапов, первым из них является сбор биологического материала. Его получают путем биопсии или изъятия материала во время проведения операции.

Кусочек ткани помещают в формалин и направляют в лабораторию, где его подвергают изменениям:

  1. Материал обезжиривают специальными составами и заливают парафином. В таком состоянии он может храниться практически вечно, поэтому при необходимости исследование можно повторять.
  2. На следующем этапе получают тончайшие срезы — проводят микротомирование. Их размещают на специальных стеклах.
  3. Приготовленные срезы обрабатывают растворами антител определенной концентрации. Использовать для обработки могут составы, содержащие разное количество антител. Какие из них вступят во взаимодействие с раковыми клетками, будет зависеть от разновидности опухоли.

Результаты исследования будут готовы только через одну или две недели.

Пациенту делают биопсию перед ИГХ-исследованием. Что это такое? Под местной анестезией из опухоли отщипывают кусочек ткани (биоптат). Этот материал и исследуют под микроскопом. В некоторых случаях на анализ берут ткани, удаленные в ходе хирургической или эндоскопической операции.

Затем биоптат обезжиривают и обрабатывают парафином. Это необходимо для сохранности материала. В результате получают парафиновые блоки, которые затем нарезают чрезвычайно тонкими слоями.

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) рака молочной железы: что показывает, расшифровка результатов. Как проводится игх анализ

Полученные срезы обрабатывают препаратами с антителами к разным видам злокачественных клеток. Могут использоваться следующие наборы для анализа:

  1. Малая панель. В этот набор входит до 5 антител.
  2. Большая панель. Может содержать от 6 до нескольких десятков видов антител.

Выбор необходимых антител для исследования зависит от предполагаемого диагноза. В направлении на анализ лечащий врач указывает – какие именно виды антигенов необходимо выявить у пациента. В зависимости от этого и подбирают реагенты для теста.

Получить результаты анализа на руки можно спустя 1 – 2 недели после проведения исследования.

Как проводится анализ

Иммуногистохимия рака молочной железы по прямому методу проводится в 6 этапов:

  • Врач проводит трепанобиопсию молочной железы. Он берет небольшой кусочек ткани с места предполагаемой опухоли (где пациентка чувствует боль или дискомфорт).
  • Образец ткани направляют в лабораторию, где помещают в формалин. Это нужно для обезжиривания образца.
  • Затем ткань извлекают и окунают в жидкий парафин. Это первый этап в подготовке образца к исследованию под микроскопом.
  • Полученный блок из ткани молочной железы и застывшего парафина разрезают на тонкие кусочки толщиной до 1 мм.

Каждый полученный срез окрашивают антителами. Через определенное время лаборант исследует срез и делает заключение. Время реакции может занимать от 3 часов до 12 дней в зависимости от метода ИГХ.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия

Такой анализ просто незаменим, если есть подозрение на наличие раковых клеток в груди. Обязательно определение количества рецепторов эстрогена и прогестерона. При их повышении активизируется процесс роста злокачественных клеток.

ИГХ-исследование позволяет не только распознать онкологическое заболевание, но и определить его стадию. При помощи исследования врачи выясняют, показана ли гормональная терапия.

Опухоли, имеющие большую концентрацию гормонов, чаще всего вполне эффективно лечатся антигормональными препаратами.

Во время проведения анализа обязательно определяют показатель Ki-67, он помогает определить злокачественность процесса. Если иммуногистохимическое исследование молочной железы показывает Ki-67 до 15 %, то исход заболевания считается благоприятным. Если показатель доходит до 30 %, то без химиотерапии не обойтись, потому что опухоль растет довольно быстро. Отметка в 90 % чаще всего свидетельствует о неизбежности летального исхода.

Данный анализ назначается не только при подозрении на онкологию груди, но еще он оказывается довольно информативным, если:

  • Имеется бесплодие.
  • Обнаружены злокачественные образования матки.
  • Наблюдаются патологические изменения в репродуктивной системе.

Такой анализ проводится, если:

  • Часто наблюдаются выкидыши.
  • У женщины было несколько неудачных попыток ЭКО.
  • Диагностирована хроническая форма эндометрита.

Данное исследование помогает выяснить, имеются ли клетки, мешающие зачатию естественным путем.

ИГХ-исследование тканей эндометрия назначается женщинам, у которых уже было несколько неудачных попыток искусственного оплодотворения.

Взятие тканей эндометрия проводится в разные дни цикла, которые назначает врач.

Что означают результаты?

Необходимо иметь в виду, что исследовать подготовленные образцы тканей имеет право только врач, имеющий сертификат, подтверждающий специальную подготовку по проведению анализов по методу ИГХ.

В заключении должно быть указано:

  1. Показатели антител, к которым определена тропность исследуемой ткани.
  2. Указывается разновидность раковых клеток и их количество.
  3. Указываются выявленные антигены, которые помогают установить вид онкологии.

По результатам исследования нельзя ставить окончательный диагноз. Врач-онколог имеет право это сделать только после получения интерпретации всех диагностических процедур.

Таким образом, можно сделать вывод, что эффективно иммуногистохимическое исследование при раке молочной или других желез и других видах онкологии. Анализ дает исчерпывающую информацию и позволяет распознать начинающийся патологический процесс на клеточном уровне.

В результате анализа указан показатель Ki-67 и статус HER2. Сначала проведем расшифровку показателя Ki-67.

Ki-67 – это белок, который используется как онкомаркер при карциноме молочной железы. Этот белок содержится в ядре клеток и в норме, но при онкозаболевании его концентрация резко возрастает. В первую очередь это касается пациентов с ER-положительным раком (повышенное содержание эстрогена в тканях молочной железы). Чем выше уровень Ki-67 в процентном отношении, тем хуже прогноз для пациента.

Расшифровка статуса HER2 более простая: он может быть положительным или отрицательным. Если статус положительный, это говорит о высоком содержании рецепторов HER2 в образце ткани. Это вызвано особым видом карциномы молочной железы, который развивается быстрее, а потому более опасный. Лечить такое заболевание нужно с помощью препаратов, действие которых направлено на белок HER2.

которые определяют ак

Также в результатах исследования могут указать статус ER и PR. Аббревиатура ER означает, что у пациента диагностирован рак с преобладанием рецепторов эстрогена. Точно так же маркировка PR говорит о раке с рецепторами прогестерона. Если после обеих аббревиатур стоит “–”, значит, в образце ткани нет карциномы молочной железы с рецепторами этих гормонов.

Итак, по итогам вышесказанного выделим две разновидности рака молочной железы:

  • С повышенной концентрацией рецепторов прогестерона или эстрогена (PR или ER ). Клетки этого подвида рака называют гормонально-положительными.
  • С преобладанием HER2 (HER2-положительный результат анализа).

У обоих подвидов уровень онкобелка Ki-67 в ядре или хромосомах клеток выше нормы. Рассмотрим, какое лечение назначают при тех или иных результатах ИГХ.

ER и PR рак лечат гормональной терапией. Лечение направлено на снижение соответствующего гормона в молочной железе. Такой вид заболевания лечится гораздо легче, при этом ремиссия наступает в 95 % случаев при уровне Ki-67 менее 10 %. Однако существует риск, что через несколько лет после лечения возникнет рецидив.

Есть случаи, когда результат анализа выявил HER2 3, ER и PR одновременно. Это так называемая тройная-позитивная опухоль. В этом случае сначала назначают препарат, направленный на белок HER2. Затем в курс лечения добавляют препараты, снижающие уровень эстрогена и прогестерона.

Если результат анализа отрицателен для HER2, ER и PR, но уровень белка Ki-67 выше 10 %, диагностируют более опасный вид рака. Чаще всего он встречается у женщин из Африки и Латинской Америки. Опухоль развивается быстро и перерастает в злокачественную, поэтому здесь поможет только химиотерапия.

Иммуногистохимия молочной железы — это сложный многоступенчатый анализ, на результат которого влияет множество факторов, например, низкое качество реагентов, недостаточная фиксация исследуемого биологического объекта или неправильно подобранная панель антител. Количество искомых клеток-мишеней исчисляется сотнями, поэтому специалист должен понимать, что он ищет и использовать для этого необходимые антитела.

Гистологи оценивают интенсивность окрашивания опухолевых клеток после взаимодействия с реактивами по специальной шкале:

  • 0-1 — онкологии нет;
  • 2 — онкологическое образование отрицательное;
  • 3 — онкологическое образование положительное.

Длительность ИГХ при раке молочной железы во многом зависит от способа его проведения. Бывает ручной и автоматический. Последний считается более совершенным, поскольку вероятность технической ошибки сведена к минимуму, да и проводится он гораздо быстрее.

Перед определением тактики лечения онколог задается различными вопросами: какова вероятность рецидива заболевания у больного или его смерти, какой результат лечения можно ожидать. Для этого специалист изучает особенности и характеристики опухоли и в зависимости от различных предсказывающих и прогностических факторов назначает тактику лечения.

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) молочной железы

К этим факторам относятся основополагающие признаки, которые определяют особенность протекания болезни и ее исход. При операбельных формах онкологии груди к таким факторам относятся: морфологическое строение новообразования и его размер, состояние лимфоузлов. Т. е. подобные характеристики определяют хронологию болезни.

Особенности прогностических факторов:

  1. Базируются на биологических характеристиках опухолевого образования.
  2. Взаимосвязаны с продолжительностью жизни пациента в независимости от тактики терапии.
  3. Делят пациентов по степени риска смерти, рецидива.
  4. Примеры: индекс митотической активности, протеолитические ферменты, антиогенез и др.

Индекс митотической активности (MAI) является независимым прогностическим фактором, который характеризует продолжительность жизни больных. У пациентов с индексом меньше 10 в процессе наблюдения летальный исход составлял 6 %, у пациентов с индексом больше 10 — 28 %.

Протеолитические ферменты имеют значение в процессе метастазирования. В трансформированных злокачественных клетках таких ферментов вырабатывается больше, чем в здоровых, поэтому при злокачественных образованиях наблюдается выход этих веществ в межклеточное пространство и увеличение активности. Т. е.

Способность новообразования расти и метастазировать во многом зависит от ангиогенеза — образования новых кровеносных сосудов. В процессе наблюдения пациентов в течение 10 лет, было выявлено, что у женщин с высоким значением плотности микрососудов в опухоли прогноз хуже.

Иммуногистохимия (ИГХ-анализ) рака молочной железы: что показывает, расшифровка результатов. Как проводится игх анализ

Эти факторы предсказывают эффективность лечения. Они помогают выделить группу пациентов с более-менее значимым ответом на проводимую терапию. К примеру, опреелить эффективность гормональных препаратов, уровень рецепторов стероидных гормонов.

К клиническим факторам, которые помогают интерпретировать ответ на терапию при метастатической форме рака относятся:

  1. Локализация и количественный показатель метастазов. Например, при поражении кости — прогноз относительно благоприятный; поражение кости, 2 органов, легких — менее благоприятный; при поражении больше 2 органов, наличии метастаз в печени, мозгу и пр. — неблагоприятный.
  2. Временной интервал между лечением первичного новообразования и появления метастазов. Чем он продолжительнее, тем благоприятнее прогноз.
  3. Общее состояние здоровья пациента.
  4. Возрастная категория. Женщины в постменопаузе имеют больше шансов на благоприятный ответ на терапию.
  5. Рецепторы стероидных гормонов в опухоли (гормононезависимые новообразования не реагируют на гормональное лечение).

Метастатический рак молочных желез считается хронической патологией. После полного регресса, полученного в результате химиотерапии, продолжительность жизни 5-10 лет встречается достаточно редко, примерно в 5-20 % случаев. Поэтому для лечения считается оптимальным вариантом — последовательное применение лечебных воздействий с как можно меньшей токсичностью, чтобы получить максимальный паллиативный эффект и отсрочить прогрессирование патологии, смерти.

Достоверность результатов ИГХ молочной железы достигает 99 %. Методика чувствительна и высокоспецифичная. Она помогает верифицировать патологический процесс и установить стадию заболевания. Для ее проведения необходимо минимум биоптата и реактивов, при этом она будет информативна даже спустя длительное время после взятия биопсии.

Прогностические факторы

По уровню Ki-67 можно сделать предварительный прогноз независимо от способа лечения пациента. Прогноз указан в таблице ниже.

Уровень содержания Ki-67, %

Прогноз выживаемости пациента, %

{amp}lt;10

95

10–15

85

15–30

70–75

90

0

Существуют и другие, не менее важные прогностические факторы, о которых нужно знать пациенту с раком молочной железы:

  • Размер опухоли.
  • Степень злокачественности опухоли.
  • Наличие метастазов в лимфатических узлах.
  • Маркеры, которые определяют активность синтеза ДНК.
  • Уровень прогестерона и эстрогена.

Факторы, которые помогут предсказать ответ на лечение рака молочной железы:

  • Интервал между лечением опухоли и возникновением метастазов.
  • Скорость увеличения размеров метастазов и временные промежутки между появлением новых метастазов.
  • Количество метастазов и их расположение.
  • Возраст и общее состояние больной.
  • Менструальный цикл пациентки.
  • Химиотерапия и лечение гормонами, которые предшествовали лечению (и ответ на них).

Теперь вы знаете, как проводится ИГХ, как расшифровать его результаты, какие прогнозы можно сделать в зависимости от тяжести заболевания и какие существуют предсказывающие факторы. Желаем вам быть здоровыми, чтобы надобность в иммуногистохимическом исследовании никогда не возникла!

Что показывает

иммунохимия

Биопсия с иммуногистохимией являются важной частью верификации диагноза при раке молочной железы, предстательной железы, мягких тканей и пр. Особенно актуально исследование для выявления лимфом, поскольку зачастую диагностировать эту болезнь без ИГХ невозможно. Большую роль ИГХ исследование играет в определении гистологического типа недифференцированных опухолевых образований, а также метастазов, которые имеют невыясненный первичный очаг.

Иммуногистохимия рака молочной железы полезна в прогнозировании течения опухолевого процесса и возможности таргентной терапии. Она помогает оценить:

  • функциональное состояние клеток образования;
  • злокачественный потенциал и темп роста опухоли;
  • тенденцию к метастазированию.

Нередко пациентам назначаю одновременно гистограмму и ИГХ-исследование. Что это такое, и чем отличаются эти два вида анализов? При гистограмме биоматериал исследуют под микроскопом и определяют наличие раковых клеток. При иммуногистохимическом исследовании злокачественные новообразования выявляют с помощью реакции “антиген – антитело”. Такой способ исследования считается более информативным.

ИГХ показывает не только наличие атипичных клеток. С помощью этого исследования можно выявить:

  • разновидность новообразования;
  • распространение онкологического процесса;
  • расположение первичной метастазирующей опухоли;
  • стадию рака;
  • темпы роста опухоли.

Кроме этого, с помощью иммуногистохимии можно определить чувствительность раковых клеток к химиопрепаратам и облучению. Это позволяет выбрать наиболее эффективный метод лечения.

Как делается анализ?

Чтобы провести исследование, необходимы образцы самой опухоли и близлежащих тканей. Их можно получить при биопсии или после хирургического вмешательства. Материалу необходимо пройти несколько этапов подготовки перед исследованием: фиксация, промывание, обезвоживание, погружение в парафин или заливка другим веществом.

Исследуемый биологический объект должен получиться плотным, но не хрупким. Сначала материал промывают, обезвоживают и уплотняют в спиртах возрастающей крепости. Затем его просветляют путем погружения в смесь абсолютного спирта и О-ксилола в пропорции 1:1. После этого помещают в несколько порций чистого О-ксилола.

Затем лаборант производит с этих блоков срезы, при помощи специального прибора — микротома, толщиной до 1 мкм. Полученные срезы наклеивают на предметное стекло, которое смазано глицерином и смесью белка. Подсушивают.

Чтобы исследуемый материал вступил в реакцию с антителом, необходимо его обезжирить и удалить парафин. Процедура называется депарафинизация. Для ее проведения используют 3 порции О-ксилола, а также спирты нисходящей крепости.

Последний этап — окрашивание. Оно проводится для того, чтобы четко видеть структуру тканей под микроскопом. Лаборанты могут использовать огромное количество красителей. Условно их можно классифицировать по:

  • происхождению, например, животные — кармин, растительные — гематоксилин, синтетические — эозин;
  • химическим свойствам, например, нейтральные, основные, кислые.

Чаще всего для этой процедур используют эозин, гематоксилин. Биологический материал помещают в раствор гематоксилина на несколько минут, затем промывают и дифференцируют результаты окрашивания. После этого провидится окрашивание в эозине, промывание и обезвоживание в спиртах восходящей крепости. Последовательная многоэтапная окраска позволяет на каждом этапе все больше определить нозологию и фенотип опухолевого образования.

Чтобы получить точные данные о патологическом процессе и верифицировать заболевание  лаборант приступает к обработке подготовленного образца специальными реактивами, содержащими меченые антитела. В результате происходит реакция между антителом и антигеном. Это сопровождается характерной визуализацией, которая зависит от веществ, используемых для маркировки.

Рейтинг
( Пока оценок нет )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
LadyLess.ru - Медпортал
Adblock detector